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產(chǎn)品中心實驗檢測服務(wù)細(xì)胞實驗細(xì)胞熒光染色實驗
產(chǎn)品簡介
利用抗原抗體反應(yīng)，鑒定細(xì)胞是否表達(dá)某種蛋白。細(xì)胞經(jīng)固定后，用特異性抗體（一抗）識別目的蛋白，再用一抗的抗體（二抗）識別一抗，二抗一般耦聯(lián)熒光基團(tuán)或化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)，通過熒光或化學(xué)發(fā)光顯示目的蛋白。細(xì)胞熒光染色實驗是常見細(xì)胞實驗之一。
| 品牌 | 其他品牌 |
|---|
4% 多聚甲醛室溫固定 15–20 min
PBS 洗 3×5 min
0.1% Triton X-100 室溫 10 min
PBS 洗 3×5 min
膜蛋白不用通透。
5% 牛血清白蛋白（BSA）或山羊血清
室溫封閉 30–60 min，減少非特異性結(jié)合
滴加一抗（按說明書稀釋，通常 1:100–1:1000）
4℃ 濕盒過夜
次日 PBS 洗 3×5 min
熒光二抗（FITC 綠 / Cy3 紅 / Alexa 系列）
室溫避光孵育 1 h
PBS 洗 3×5 min
DAPI 染色 5 min
PBS 洗去多余染料
抗熒光淬滅封片劑封片
4℃ 避光保存，盡快拍片
DAPI（藍(lán)）：所有細(xì)胞核
目標(biāo)蛋白（綠 / 紅）：陽性表達(dá)部位
共定位：黃色（紅綠疊加）
可半定量：
平均熒光強(qiáng)度（Mean Fluorescence Intensity, MFI）
陽性細(xì)胞比例
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