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誘導多功能干細胞實驗

產品簡介

iPS干細胞的出現,在干細胞研究領域、表觀遺傳學研究領域以及生物醫學研究領域都引起了強烈的反響,這不僅是因為它在基礎研究方面的重要性,更是因為它為人們帶來的光明的應用前景。
誘導多功能干細胞實驗是常見細胞實驗之一。

產品型號:
更新時間:2026-03-20
廠商性質:代理商
訪問量:1597
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階段1:實驗設計與準備
  • 目標設定:明確研究目的(疾病建模、藥物篩選、機制研究、細胞治療前探索)。


  • 體細胞選擇:根據易獲取性、增殖能力、遺傳背景、表觀遺傳狀態選擇(常用:皮膚成纖維細胞、外周血單個核細胞、尿液上皮細胞)。


  • 重編程因子選擇


    • 經典Yamanaka因子:OCT4, SOX2, KLF4, c-MYC (OSKM)。


    • 其他組合:OCT4, SOX2, NANOG, LIN28 等。


  • 重編程方法選擇(關鍵決策點,見第二部分詳述)。


階段2:體細胞培養與準備
  • 原代細胞提取、培養擴增,確保細胞狀態良好、無污染。


階段3:重編程誘導
  • 將重編程因子導入體細胞。


  • 將轉導后的細胞以合適的密度接種在滋養層細胞(如小鼠胚胎成纖維細胞,MEFs)或包被了基質膠(Matrigel)/玻連蛋白的培養皿上。


  • 使用iPSC培養基(如mTeSR, Essential 8)進行培養,定期換液。


階段4:iPSC克隆的識別、挑取與擴增
  • 識別:約2-4周后,出現類似人胚胎干細胞的、邊界清晰、核質比高的克隆


  • 挑取:在顯微鏡下用槍頭或克隆環機械挑取單個克隆。


  • 擴增:將克隆打散成小團塊,傳代至新的培養板中,逐步擴大培養。


階段5:iPSC系的鑒定與建系
這是驗證實驗成功與否的核心,需多維度驗證:
  1. 形態學:典型的ESC樣克隆形態。


  2. 多能性標志物表達


    • 免疫熒光/流式細胞術:檢測OCT4, SOX2, NANOG, SSEA-3/4, TRA-1-60/81等蛋白表達。


    • qRT-PCR:檢測內源性多能性基因的mRNA表達水平。


  3. 表觀遺傳狀態:檢測多能性基因啟動子區(如OCT4, NANOG)去甲基化狀態。


  4. 分化潛能(功能驗證準)


    • 體外擬胚體形成:驗證其自發分化為三個胚層(內、中、外胚層)細胞的能力。


    • 體內畸胎瘤實驗:將iPSC注射到免疫缺陷小鼠體內,形成包含三胚層組織的畸胎瘤。


  5. 核型分析:確保在重編程和擴增過程中未發生染色體異常。


  6. STR指紋鑒定:驗證iPSC與來源體細胞的遺傳一致性,排除交叉污染。


階段6:iPSC的維持、保藏與后續分化
  • 維持培養:在無滋養層條件下,使用確定成分的培養基進行傳代培養。


  • 冷凍保藏:建立主細胞庫和工作細胞庫。


  • 定向分化:根據研究目標,將iPSC分化為特定細胞類型(如神經元、心肌細胞、肝細胞)。





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