流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)

Name: 流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)流式細(xì)胞術(shù)工作原理是在細(xì)胞分子水平上通過單克隆抗體對(duì)單個(gè)細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù)，具有速度快、精度高、性好的優(yōu)點(diǎn)，是當(dāng)代的細(xì)胞定量分析技術(shù)之一。
流式細(xì)胞術(shù)（三標(biāo)）實(shí)驗(yàn)是常見細(xì)胞實(shí)驗(yàn)之一。

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更新時(shí)間：2026-03-20

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實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)

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主要組成部分與工作流程

1. 樣本制備：獲得單細(xì)胞懸液

這是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。需要制備出細(xì)胞分散良好、無團(tuán)塊、活性高的單細(xì)胞懸液。
來源：培養(yǎng)的細(xì)胞系、血液、骨髓、淋巴結(jié)、脾臟、實(shí)體瘤組織等。
對(duì)實(shí)體組織，常需酶消化（如膠原酶、胰酶）和機(jī)械分散。

2. 熒光標(biāo)記：用熒光染料偶聯(lián)的抗體“標(biāo)記"細(xì)胞

這是實(shí)現(xiàn)“多參數(shù)"分析的基礎(chǔ)。抗體特異性結(jié)合細(xì)胞表面或內(nèi)部的靶蛋白。
直接染色：使用偶聯(lián)了熒光染料的抗體直接標(biāo)記。
間接染色：使用未標(biāo)記的一抗，再用熒光標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測(cè)（較少用，易增加非特異性背景）。
胞內(nèi)染色：如需檢測(cè)細(xì)胞因子、磷酸化蛋白等，需先固定和破膜。

3. 上機(jī)檢測(cè)：流式細(xì)胞儀運(yùn)行

細(xì)胞懸液在鞘液的包裹和聚焦下，形成單細(xì)胞流通過流動(dòng)室。

激光照射：一束或多束不同波長(zhǎng)的激光（如488nm藍(lán)激光， 405nm紫激光， 640nm紅激光）照射細(xì)胞。
信號(hào)檢測(cè)：細(xì)胞被激發(fā)后產(chǎn)生多種信號(hào)，被不同的探測(cè)器接收：

前向散射：反映細(xì)胞的相對(duì)大小。
側(cè)向散射：反映細(xì)胞的內(nèi)部顆粒度和復(fù)雜性。
散射光信號(hào)：
熒光信號(hào)：熒光染料被激發(fā)后發(fā)射的特定波長(zhǎng)熒光，反映目標(biāo)分子的表達(dá)水平。每個(gè)熒光通道對(duì)應(yīng)一種標(biāo)記物。

4. 數(shù)據(jù)分析：從數(shù)據(jù)到生物學(xué)意義

儀器收集每個(gè)細(xì)胞的多個(gè)參數(shù)數(shù)據(jù)，形成流式數(shù)據(jù)文件，用軟件（如FlowJo， FCS Express）進(jìn)行分析。

設(shè)門：這是核心分析策略。在一張二維點(diǎn)圖或等高線圖上，根據(jù)細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)參數(shù)，圈定出感興趣的細(xì)胞亞群。常見策略：

用FSC-A/SSC-A 門排除碎片和死細(xì)胞，圈出活細(xì)胞。
用FSC-H/FSC-A 或SSC-H/SSC-A 門排除粘連細(xì)胞，得到單細(xì)胞。
再用熒光標(biāo)記進(jìn)一步區(qū)分不同細(xì)胞亞群（如CD3+ T細(xì)胞， CD4+ 輔助T細(xì)胞， CD8+ 殺傷T細(xì)胞）。