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產(chǎn)品中心實驗檢測服務(wù)細(xì)胞實驗細(xì)胞平板克隆形成實驗
產(chǎn)品簡介
細(xì)胞平板克隆形成實驗是當(dāng)單個細(xì)胞在體外增殖6代以上,其后代所組成的細(xì)胞群體,稱為集落或者克隆。每個克隆含有50個以上的細(xì)胞，大小在0.3-1.0mm之間。集落形成率表示細(xì)胞的獨立生存能力。細(xì)胞接種存活率只表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞數(shù),但貼壁的細(xì)胞不一定每個都能增殖和形成克隆。
| 品牌 | 其他品牌 | 產(chǎn)地類別 | 國產(chǎn) |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
平板克隆形實驗步驟
1、細(xì)胞懸液制備:取對數(shù)生的單層培養(yǎng)細(xì)胞，用0. 25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細(xì)胞，離后用*培養(yǎng)基重懸,制成細(xì)胞懸液。
2、細(xì)胞種板:將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋，以每皿50、100、 200、 500、1000、 2000個細(xì)胞的梯度密度分別接種含1 ml 37 C預(yù)熱培養(yǎng)液的皿中，并輕輕轉(zhuǎn)動，使細(xì)胞分散均勻。置37 C 5% Co2的環(huán)境下，靜置培養(yǎng)。
3、細(xì)胞觀察:顯微鏡下觀察到單個細(xì)胞長到20個以上細(xì)胞克隆，培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時，終止培養(yǎng)。棄去.上清液，用PBS小心浸洗2次。加純甲醇1ml,固定15分鐘。然后去固定液,加適量Giemsa應(yīng)用染色液染10分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥，手記拍照采集圖像。
4、克隆計數(shù):用肉眼直接計數(shù)克隆數(shù)，后計算克隆形成率。
結(jié)果分析
平板克隆克隆形成率=克隆數(shù)接種細(xì)胞數(shù)x100%
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